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蛋白質電泳

w66利来平台 自成立以來的幾十年里 ,蛋白質電泳的核心原則并沒有改變。然而,改進和改進繼續使其成為生命科學中**重要的技術之一。二維(2D)蛋白質電泳作為一種簡單,廉價且易于分離的混合物中蛋白質的工具仍然是**的。對于復雜的生物樣品,例如組織勻漿,尤其如此,低豐度蛋白質(通常具有特定的生物學意義)可能難以從中抽出。

在電泳期間,通過凝膠基質的電流的力使得樣品混合物中的不同蛋白質種類以不同的速率遷移通過凝膠。電荷,大小,形狀,添加修飾(例如磷酸基團)和多聚化的差異都可以影響蛋白質在電泳期間的遷移速率。在電泳之前,大多數蛋白質用去污劑如十二烷基硫酸鈉(SDS)變性,以幫助蛋白質松弛并用負電荷覆蓋它們。當用SDS包被時,蛋白質主要根據大小而不是根據電荷或形狀遷移。下面是一些新工具,可以在享受這項舊技術的諸多好處時充分利用。

預制板坯凝膠可節省時間

幾十年來,Bio-Rad一直是電泳工具的主要供應商,其電泳生產線不斷創新。“Bio-Rad是**個推出預制凝膠的公司對于市場而言,這將永遠簡化和標準化電泳在蛋白質研究中的應用,“Bio-Rad的電泳和印跡市場經理Christopher Belisle博士說。“Bio-Rad將繼續在2010年推出Mini-Protean和Criterion TGX和TGX無污染凝膠。這些預制凝膠有mini和midi格式。”TGX凝膠的運行時間**快(迷你15分鐘) ,midi 20-25分鐘,以及Western印跡(15-30分鐘)的**快轉移時間。使用Laemmli緩沖區運行時不需要特殊緩沖區。TGX-Stain Free凝膠還可讓您在20-25分鐘內運行和成像凝膠。“使用黃金標準的Laemmli緩沖液時,市場上沒有其他凝膠可以快速運轉或轉移蛋白質,”Belisle說。“TGX無污染技術僅由Bio-Rad提供,進一步增強了我們對研究人員的成果時間的承諾。”Belisle認為,蛋白質電泳的主要發展將來自工作流程的改進,使流程更加高效。“這些新的[預制和無染色]凝膠使研究人員能夠專注于科學研究,并在更短的時間內完成更多的工作,并獲得更可重復的結果,”Belisle說。

w66利来平台 Invitrogen還在其NuPAGE®和Novex®系統中提供預制凝膠。此外,他們的ZOOM®臺式蛋白質組學系統為蛋白質分析提供了一體化解決方案。它將樣品分餾,1D和2D凝膠電泳以及與質譜相容的染色結合在一起。

免于平板凝膠

當使用SDS-PAGE分離蛋白質用于進一步分析時,例如質譜法之前的樣品制備方法,開始從成品凝膠中切除條帶的棘手過程。收集通過電泳分離的蛋白質的另一種方法是使用分餾系統。蛋白質發現Gelfree 8100分餾系統旨在用可編程的液相分餾回收代替電泳凝膠帶和點切割。“與普通平板凝膠PAGE一樣,[Gelfree 8100分餾系統]按大小分離復雜蛋白質混合物,但該系統的創新方面是它使用水平管 - 凝膠盒格式,每端有液體儲存器,以簡化樣品加載和餾分收集,“蛋白質發現營銷總監Matthew Wygant說。“從Gelfree系統獲得良好的蛋白質電泳結果所需的**專業技能是良好的移液技術。”兩種系統 - 傳統平板凝膠和Protein Discovery的Gelfree系統 - 使用SDS-PAGE根據大小分離蛋白質混合物。但是,Gelfree系統針對樣品制備進行了優化。

從電泳到質譜

Wygant認為,蛋白質電泳**令人興奮的**新發展涉及其作為質譜分析的樣品制備方法。“近年來,質譜儀器的速度,靈敏度和分辨率不斷提高,許多蛋白質研究人員現在可以使用真正強大的質譜系統,”Wygant說。“但是他們發現他們仍然無法很好地閱讀低豐度蛋白質,而所有有趣的信號和調節正在進行中。在沒有某種預分餾的情況下分析的蛋白質混合物是如此復雜,以**于在較豐富的信號中,次要元素(感興趣的元素)丟失。但非電泳預分割方法似乎不夠具體,因此,研究人員**終沒有從質譜中得到足夠的信號進行自信的分析。“但從歷史上看,使用平板凝膠電泳作為制備系統具有挑戰性。從凝膠中切除的條帶可能導致很少或沒有蛋白質。“在Gelfree之前,確實沒有一種可靠,高產的方法可以使用凝膠電泳來制備用于質譜分析的蛋白質,”Wygant說。

使用電泳作為質譜分析的準備方法的一個未來障礙是尋找SDS等洗滌劑的替代品。“蛋白質電泳幾乎總是在表面活性劑的幫助下進行,表面活性劑幾乎總是SDS,”Wygant說。“除了其可用于提取和溶解的侵蝕性洗滌劑性質之外,SDS當然也用于向蛋白質施加凈負電荷,用于SDS-PAGE中基于大小的分級分離。但是如果你要使用質譜,SDS會引起問題,所以你必須擺脫它。有各種有效的協議,并沒有那么難,但你仍然需要在工作流程中遇到這種情況,你必須從所有樣本中刪除SDS。在將來,

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